Hybridization-Based目标浓缩

目标捕获感兴趣的基因组区域

靶向测序是研究人员选择只研究基因组的一部分，并通过富集特定基因、外显子和/或其他感兴趣的基因组区域来实现的一种应用。这使得测序读取只专注于那些特定的区域，从而节省了时间和成本。^1、2、3成功地将宝贵的样本转换为可进行排序的库需要几个步骤。一个叫做目标富集的额外步骤，涉及到富集特定的目标区域，可以添加到这个样品制备工作流中。这一步骤也称为靶向捕获，为研究基因表达和检测突变(包括结构变异和拷贝数变异)提供了一种强大的方法。

新一代测序最常用的富集方法是基于杂交或捕获的目标富集和基于扩增子的目标富集。基于捕获的方法使用特定的探针进行富集，基于扩增的方法使用PCR的力量来做同样的事情。这两种方法各有优缺点;选择正确的方法可能取决于使用该方法的应用程序的类型。

基于杂交的目标富集是如何工作的?

靶区杂交可以发生在固体表面(微阵列)或溶液中。基于阵列的方法存在成本高、样本数量有限、样本需求量大等缺点。基于解决方案的方法克服了这些限制，同时保留了它的优点，如可伸缩和易于自动化。

在基于溶液的方法中，基因组DNA首先被剪切成随机大小的碎片，通过机械或酶的DNA碎片。然后通过连接反应添加带有样本特定条形码序列的测序器特定适配器。生物素化寡核苷酸探针池靶向所需基因，外显子和/或其他感兴趣的基因组区域被添加到适配器连接的DNA溶液中与感兴趣的目标区域杂交。然后用链霉亲和素包被的磁珠捕获和纯化杂交探针，随后进行扩增和测序。

杂化靶富集的优点

• 提供基因变异发现研究所需的深度和覆盖的一致性
• 最大化与基因组对齐的目标读取和读取
• 通过专注于感兴趣的特定区域，可以节省时间和排序工作

杂化基靶富集的应用

• 单核苷酸多态性(SNP)检测
• 插入/删除(indel)检测
• 拷贝数变异(CNV)检测
• 结构变异检测