图书馆量化

概述

用于下一代测序(NGS)的库的量化通常在库被池用于目标富集或扩增之前执行，以确保在多路复用应用中索引库的平等表示。量化也用于确认单个库或库池在测序之前被最佳稀释。准确和可复制的定量适配器连接文库分子对于获得一致和可复制的结果和最大限度地提高测序产量至关重要。加载超过推荐数量的DNA可能导致流细胞饱和或簇密度增加，而加载低于推荐数量的DNA可能导致簇密度降低，覆盖率和深度降低。两者都导致了较高的整体测序成本。

NGS文库的定量方法主要有电泳、荧光测定、分光光度法、数字PCR、液滴数字PCR或qPCR。虽然每种方法都有其优点和缺点，但基于qpcr的方法被广泛使用是因为它能够针对特定的测序平台(用于丰富绑定到适配器的DNA序列)的适配器序列，以及它量化可放大DNA数量的能力。然而，在执行基于qpcr的方法时，使用高效的聚合酶和DNA标准是至关重要的，该标准已被证明批次对批次的一致性。

罗氏测序解决方案提供KAPA文库定量试剂盒，作为使用qPCR进行NGS文库定量所需试剂的解决方案。