KAPA hgDNA定量和QC试剂盒

概述

KAPA hgDNA定量和QC试剂盒包含在NGS文库构建之前，基于qpcr的人类基因组DNA样本定量和质量评估所需的所有消耗品。每个试剂盒包含KAPA SYBR FAST qPCR Master Mix，通过我们的定向进化技术优化了高性能SYBR Green i型qPCR，一组预稀释的DNA标准物和引物预混物，针对高度保守的单拷贝人类位点的不同部分。绝对定量是通过引物对定义最短片段和额外的引物提供有关DNA样本中可扩增模板数量的信息来实现的。该试剂盒生成的质量评分(或q -ratio)可用于预测文库构建的结果或为不同质量的样本定制工作流程，特别是FFPE DNA。

KAPA hgDNA定量和QC试剂盒的好处

• 定量和质量评估与单一的化验
• 能够将质量分数与排序指标相关联
• 一个多功能且易于自动化的工作流程

hgDNA定量和QC检测原理

首先，使用三种不同的引物对，在一个保守的单拷贝人类位点内扩增41 bp、129 bp或305 bp的目标，使用一组DNA标准物生成最多三条标准曲线。接下来，41 bp法用于DNA样本的绝对定量。为了评估DNA质量，生成标准曲线，并用129 bp和/或305 bp引物预混物(es)对样品进行分析。由于较差的DNA质量对较长靶标的扩增有较大的影响，DNA样本的相对质量可以通过将129 bp或305 bp测定法获得的浓度与41 bp测定法获得的浓度归一化来推断。这种归一化产生了一个q比(值在0到1之间)，它表示DNA质量，或DNA样本中可放大物质的数量。