通用ProbeLibrary
产品停产通知
请注意，通用探针库分析设计中心将在2020年12月31日之前限量开放。如果您对检测设计中心或通用探针库产品的可用性有任何疑问，请联系Merck KGaA技术支持以获得更多信息。
基于仅165个短水解探针取代锁定核酸，通用ProbeLibrary (UPL)允许您在几秒钟内设计实时qPCR分析，并分析几乎任何测序生物的500多万个转录本。易于使用的ProbeFinder检测设计软件显示目标特异性引物序列(可以在您首选的寡核苷酸供应商订购)和匹配的Universal ProbeLibrary探针。
万能ProbeLibrary分析与所有实时PCR仪器兼容，能够检测荧光素，FITC, FAM和/或SYBR®绿色I，并遵循水解探针测定的标准循环协议。
选择不同的通用ProbeLibrary产品:
- Universal ProbeLibrary Set, Human with Probes #1到#90用于人类RT-qPCR检测
- 通用ProbeLibrary扩展集，探头#91 - #165用于与通用ProbeLibrary集结合使用，人类用于所有其他生物
- Universal ProbeLibrary Single Probes #1到#165
- 万能概率基因分析，人类
- 万能概率小鼠ACTB基因测定
- 通用ProbeLibrary小鼠GAPD基因检测
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通用概率系统技术
LNA-based探针
UPL仅基于165个短水解探针。它们在5'端用荧光素(FAM)标记，在3'端用深色淬灭染料标记。
UPL探针的广泛转录覆盖范围是由于它们的长度很短，只有8 - 9个核苷酸和选定的序列。为了保持杂交qPCR探针所需的特异性和熔化温度(Tm)，锁定的核酸(LNA)被合并到每个UPL探针的序列中。LNA是与标准DNA核苷酸相比结合强度增加的DNA核苷酸类似物。
165个UPL探针的序列经过精心挑选，以检测在转录组中非常普遍的8-和9-mer基序，确保在给定的转录组中对所有转录本的最佳覆盖。
在人类转录组中，每个探针与大约7000个转录本结合，而每个转录本由大约16个不同的探针检测。在一个给定的PCR试验中，一次只能检测到一个特定的转录本，这是由一组选择的PCR引物所定义的。对于每一种检测方法，设计软件都建议一组最优的PCR引物、探针和任何可能的替代组。
UPL检测与所有能够检测荧光素、FITC、FAM和/或SYBR的实时PCR仪器兼容®绿色I. UPL分析已成功用于LightCycler®480系统，LightCycler®基于旋转盘的系统，和其他实时PCR仪器由几个供应商。
阅读更多通用概率库系统性能数据
采用的技术
锁定核酸(LNA)是一类核酸类似物，其中核糖环被亚甲基桥“锁定”，连接2’-O原子和4’-C原子。DNA和RNA中含有六种常见碱基(T, C, G, A, U和mC)的LNA核苷能够根据标准的沃森-克里克碱基配对规则与它们的互补核苷形成碱基对。
图中显示了LNA、DNA和RNA的比较。
因此，只要需要，LNA核苷酸可以与寡核苷酸中的DNA或RNA碱基混合。锁定的核糖构象增强了碱基的堆叠和主链的预组织，从而提高了双工结构的热稳定性和鉴别能力。LNA能在其他核酸无法识别的条件下识别单碱基错配。
图中显示了LNA和DNA错配条件的比较。
多路检测
多重分析与通用概率参考基因分析
使用Universal probelibrays与Universal probelibrays一起，在双色试验中轻松量化与内源性内参基因相关的人、小鼠或大鼠基因的表达水平。人类有3种内参基因测定(G6PDH、GAPD和ACTB-基因)，小鼠有2种内参基因测定(ACTB-和GAPD基因各)。
每个Universal ProbeLibrary内参基因检测法在单独的试管中提供专门设计的12 mer UPL内参基因探针和相应的内参基因特异性引物对。探针在5´端标记为LightCycler®黄色555，在3´端附近标记为深色淬灭染料，以便与标有FAM的标准UPL探针一起进行双色分析。UPL内参基因探针可以使用实时PCR仪器检测，激发滤波器为470 nm至530 nm，发射滤波器为550 nm至610 nm。在多重分析中，标准FAM或SYBR®绿色I滤光片被用作检测fam标记的UPL探针的第一个通道，以及较长波长的发射滤光片(通常下一个可能的发射滤光片移动到较长的波长，例如,560 nm或568 nm)作为检测UPL内参基因探针的第二通道。
目的基因和UPL参比基因的多重PCR检测由检测设计中心的ProbeFinder软件设计，成功率超过90%。如果选择的内参基因(在列出的测定法之外)没有找到匹配的测定法，ProbeFinder SW建议使用列表之外的一个或多个其他内参基因的双色测定法。
设计多重检测方法和设计单一检测方法一样简单:当您在线选择多重检测选项时，ProbeFinder将为您感兴趣的基因设计多个UPL检测方法。同时，每一种化验都要进行在网上PCR测试，以验证它可以与相关生物体的一个(或多个)UPL内参基因测定多路杂交。
使用LightCycler®480 Real-Time PCR系统，在仅检测一种引物和探针组合时，使用Universal ProbeLibrary双色法检测45个基因的表达(示例见图右)。双色法检测的Cp值与单色法检测的Cp值相差不超过0 ~ 2.0个周期。
图中显示了用Universal ProbeLibrary双色法检测到的45个基因的表达(数据由Stephan Wiemann教授提供，德国海德堡的德国癌症研究中心)。