KAPA EvoPlus套件

仅供研究使用。不用于诊断程序。

概述

一种简便高效的酶法DNA文库制备新范式

KAPA EvoPlus是一种新的酶DNA文库制备解决方案，旨在与机械剪切方法的金标准性能相媲美，同时为全基因组(WGS)，全外显子组(WES)和Illumina测序系统上执行的靶向测序应用提供无与伦比的便利。

与机械剪切相比，酶法破碎在效率、样品损失最小化和易于扩展方面更受青睐，但它还没有达到相同的数据质量水平。酶的方法通常会产生测序的伪影，掩盖可用的发现，因此迫使实验室为了方便而牺牲性能。KAPA EvoPlus是酶库制备的进化，为酶裂解带来了新的性能水平，使实验室能够在不牺牲性能的情况下实现更大的便利性。

实现新的生产力水平
最小化碎片瓶颈
保存珍贵样本的突变特征，包括FFPET和细菌DNA
轻松扩展和适应自动化工作流程

实现新的生产力水平

减少操作步骤，增加步行时间，并最大限度地减少在彩色编码的小瓶和板中使用现成的ReadyMix试剂的错误
在1.5到2.5小时内生成可排序(或可捕获目标)的库
通过一步分段和a -tail体验更快的工作流

图1:KAPA EvoPlus工作流与另一家酶裂解试剂盒供应商(“供应商A”)的比较。两个工作流程都在一个管中进行，直到可选的库放大步骤。KAPA EvoPlus ReadyMix试剂随时可用;不需要主混合物准备。与供应商相比，KAPA EvoPlus仅将两种试剂(ReadyMix #1和ReadyMix #2)添加到输入DNA中，该工作流程需要额外的试剂和混合步骤，因此增加了耗材的使用量和移液步骤的数量。EvoPlus的核心反应(所有非可选步骤)只需4个移液步骤即可完成，而供应商A需要9个。

最小化碎片瓶颈

从低质量和高质量DNA中获得可重复的片段，包括粗提取的FFPE DNA(图2)
体验在各种缓冲液中广泛的抑制剂耐受性的多功能性(图3)
可靠的碎片输入量从10纳克到500纳克(图4)

图2:KAPA EvoPlus通过输入不同质量的DNA产生可复制的片段大小。实验细节:对于中低质量输入，使用KAPA NGS DNA提取试剂盒从临床FFPET和新鲜冷冻组织中提取DNA;在库准备之前没有执行缓冲区交换。对于高质量样品，使用科里尔DNA (NA12878)作为输入。所有样品:输入文库准备100ng DNA;破碎20 min;和KAPA通用适配器，KAPA UDI底漆混合，和KAPA超纯珠子使用。

图3:KAPA EvoPlus化学在各种缓冲液中产生一致的DNA碎片。对于每个测试条件，将100 ng完整的hgDNA悬浮在不同的洗脱缓冲液中(共10个缓冲液)，并进行以下实验条件:在37°C下破碎25分钟;适配器连接15µM KAPA UDI适配器;8个PCR扩增循环。

图4:KAPA EvoPlus化学可以在不同的输入量范围内实现可重复的酶裂解。将人类基因组DNA (10 ng, 100 ng, 500 ng)在37°C下进行碎片化，以获得约300 bp的模式库插入尺寸。KAPA EvoPlus工作流程使用全长适配器(KAPA UDI适配器)完成，无需任何尺寸选择，并进行2次放大循环。使用LabChip GX Touch HT仪和HT DNA HiSens试剂试剂盒(PerkinElmer)分析最终文库。

保存珍贵样本的突变特征

测序工件改变了样本的真实突变特征，降低了测序覆盖率和一致性，导致额外的测序运行，增加了成本，并投入更多精力来实现可操作的结果。KAPA EvoPlus优于领先的酶裂解试剂盒，从而减少工件，甚至提供与金标准机械剪切相当的结果。有了KAPA EvoPlus，实验室可以对他们的结果充满信心。

对KAPA EvoPlus提供的高精度变异检测有信心吗(图5)
获得可靠的测序覆盖，接近零链分裂伪读(SSARs)(图6)
获得类似于机械剪切的序列均匀性，减少AT/GC光谱上的测序偏差(图7)

图5:KAPA EvoPlus得到的阳性预测值(PPV)与机械剪切相似。PPV是指阳性检测结果中真正呈阳性的比例。PPV越高，精度越高。实验条件:使用500 ng hgDNA和KAPA HyperPrep Kit(机械片段)或KAPA EvoPlus(用于酶片段)、供应商A或供应商b制备人类全基因组文库，各按制造商说明。所有情况都进行了双面尺寸选择。

图6:KAPA EvoPlus对股裂伪影读数(SSARs)的检测无法检测到，与机械剪切相当。供体试剂盒中存在的sars的百分比代表嵌合reads，似乎来自基因组的非连续部分。使用500 ng hgDNA和KAPA HyperPrep Kit(机械片段)或KAPA EvoPlus(用于酶片段)、供应商A或供应商b制备人类全基因组文库，各按制造商说明。所有情况都进行了双面尺寸选择。

图7:KAPA EvoPlus实现的覆盖率和均匀性几乎与KAPA HyperPrep(机械破碎)相同。其他技术显示，随着AT或gc含量百分比的增加，均匀性和覆盖率降低。1.0的标准化覆盖率分数反映了在%AT/GC含量范围内的统一覆盖率。

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规范

兼容的平台

所有Illumina测序仪器
库类型

DNA
起始物料

基因组DNA
输入数量

10ng - 500ng
设备存储

-15℃~ -25℃

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帽或盘的颜色	组件名称	包含在KAPA EvoPlus套件中 (09420037001、09420053001、09420339001、09420428001)	包含在KAPA EvoPlus Kit(无pcr)中 (09420045001、09420304001、09420371001、09420436001)
红色的	KAPA FragTail ReadyMix	是的	是的
黄色的	KAPA连接ReadyMix	是的	是的
绿色	KAPA HiFi HS ReadyMix (2X)	是的	没有

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组件名称

包含在KAPA EvoPlus套件中

(09420037001、09420053001、09420339001、09420428001)

包含在KAPA EvoPlus Kit(无pcr)中

(09420045001、09420304001、09420371001、09420436001)

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