技术

定向进化

概述

下一代测序(NGS)工作流程有几个步骤,每个步骤都可能会引入错误,这些错误可能会严重影响测序结果的质量和可靠性。因此,用于生成NGS数据的试剂和方法应具有最高质量,并需要进行测试和验证,以确保可靠的精度和准确性。虽然有几种试剂可用于NGS工作流程的不同步骤,但它们之间的差异主要是由于缓冲液的组成或酶的浓度。在常见的NGS试剂中使用的大多数DNA和rna修饰酶属于“野生型”,从自然界中分离出来,没有经过修饰,这些酶从未被用作分子生物学的工具。定向进化技术在实验室中通过模拟自然选择过程选择用于NGS的酶,以获得高效的性能。

定向进化是如何工作的?

这个过程从一个编码“野生型”或未修饰酶的基因开始。通过诱变过程将随机变异引入基因,产生数百万个基因库,每个基因编码一种独特的酶变体。然后对文库施加功能选择压力,只有编码最高性能酶的基因“存活”下来。这个随机突变和选择的过程不断重复,直到所需的酶功能进化。

定向进化有何不同?

由于在基因中引入随机突变对编码酶的功能主要是有害的,解锁定向进化的力量需要筛选大量酶变体的能力。我们的核心技术结合了一种高通量乳化液格式,其中悬浮在油中的水滴作为微反应器,与高通量选择分析相结合,能够同时对数亿种酶变体进行功能筛选。

进化酶与野生酶相比有什么好处?

定向进化使我们能够对酶的功能进行改进,如热稳定性、比活性、加工性或对抑制剂的耐药性,这些都需要对蛋白质结构进行全面的改变。这些功能是不符合合理设计的,这是一种蛋白质工程方法,需要有关酶结构和功能的详细信息。这些进化出的酶不同于其他“工程”酶,因为它们被优化了功能,不能用合理的设计来解决。

定向进化步骤
通过定向进化选择酶的应用
  • NGS库准备
  • 基于扩增子的目标富集
  • 图书馆放大
  • 质量控制
  • 聚合酶链反应
  • qPCR
探索PCR和qPCR产物
产品概述

仅供研究使用。不用于诊断程序。