包可以存储在-20˚C长达12个月。
套件包括KAPA SYBR快速qPCR大师混合(2 x),其中包含KAPA SYBR快速DNA聚合酶,反应缓冲区,核苷酸,SYBR绿色染料,和MgCl2在最后一个2.5毫米的浓度。指出,掌握混合含有instrument-specific参考染料,而通用组件包括火箭和火箭低高(50 x)分别. .
仅供研究使用。不用于诊断程序。
KAPA SYBR快速qPCR套件包含第一个DNA聚合酶工程通过定向进化技术更宽容SYBR绿色染料抑制。持续改进的健壮性,和速度的KAPA SYBR快速qPCR包导致持续高放大效率使基因表达分析更精确的相对量化相比,传统工具。*
指仪器的兼容性图表兼容的平台上的指导。
查看性能数据显示95 - 105%的反应效率对扩增子长度和GC-content使用KAPA SYBR qPCR包快。
视图数据显示更准确的定量表达困难的目标,如DMD GC含量(23.1%),切口(GC含量72.2%)KAPA SYBR快速qPCR工具包相比其他商业套件。
图3。两个目标基因放大使用10倍稀释的一系列人类基因组DNA (16 ng 1.6 pg / 20µL反应)比较四个商业工具。KAPA SYBR快速持续提供高性能的准确表达式定量在一系列困难的目标。
*数据文件。
包可以存储在-20˚C长达12个月。
套件包括KAPA SYBR快速qPCR大师混合(2 x),其中包含KAPA SYBR快速DNA聚合酶,反应缓冲区,核苷酸,SYBR绿色染料,和MgCl2在最后一个2.5毫米的浓度。指出,掌握混合含有instrument-specific参考染料,而通用组件包括火箭和火箭低高(50 x)分别. .
| 设备代码 | 2 x KAPA SYBR快速qPCR大师混合(通用) | 火箭高50 x KAPA SYBR快 | 50 x KAPA SYBR快速火箭低 | 2 x KAPA SYBR快速qPCR大师混合(各类设备染料) | 2 x KAPA SYBR快速掌握混合火箭低 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 通用 | KK4600 | X | X | X | ||
| KK4601 | ||||||
| KK4602 | ||||||
| ABI棱镜 | KK4603 | X | ||||
| KK4604 | ||||||
| KK4605 | ||||||
| Bio-Rad iCycler | KK4606 | X | ||||
| KK4607 | ||||||
| KK4608 | ||||||
| 优化了罗氏LightCycler®480年 | KK4609 | X | ||||
| KK4610 | ||||||
| KK4611 | ||||||
| 火箭低 | KK4619 | X | ||||
| KK4620 | ||||||
| KK4621 | ||||||
| KK4622 |
套件包括KAPA SYBR快速qPCR大师混合(2 x),其中包含KAPA SYBR快速DNA聚合酶,反应缓冲区,核苷酸,SYBR绿色染料,和MgCl2在最后一个2.5毫米的浓度。指出,掌握混合含有instrument-specific参考染料,而通用组件包括火箭高和火箭分别低(50 x)。
| 设备代码 | 罗氏的猫。没有 | 描述 | 包大小 |
|---|---|---|---|
| KK4600 |
07959362001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 100 x 20µL反应(通用) | 1毫升 |
| KK4601 | 07959389001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 500 x 20µL反应(通用) | 5毫升 |
| KK4602 | 07959397001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 1000 x 20µL反应(通用) | 10毫升 |
| KK4603 | 07959419001 | KAPA SYBR qPCR包- 100 x 20µL反应快,火箭(ABI棱镜) | 1毫升 |
| KK4604 | 07959427001 | KAPA SYBR qPCR包- 500 x 20µL反应快,火箭(ABI棱镜) | 5毫升 |
| KK4605 | 07959435001 | KAPA SYBR qPCR包- 1000 x 20µL反应快,火箭(ABI棱镜) | 10毫升 |
| KK4606 | 07959443001 | KAPA SYBR qPCR包- 100 x 20µL反应快,用荧光素(Bio-Rad®iCycler™) | 1毫升 |
| KK4607 | 07959451001 | KAPA SYBR qPCR包- 500 x 20µL反应快,用荧光素(Bio-Rad iCycler) | 5毫升 |
| KK4608 | 07959460001 | KAPA SYBR qPCR包- 1000 x 20µL反应快,用荧光素(Bio-Rad iCycler) | 10毫升 |
| KK4609 | 07959478001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 100 x 20µL反应(优化使用罗氏®LightCycler 480) | 1毫升 |
| KK4610 | 07959486001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 500 x 20µL反应(优化使用罗氏LightCycler 480) | 5毫升 |
| KK4611 | 07959494001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 1000 x 20µL反应(优化使用罗氏LightCycler 480) | 10毫升 |
| KK4617 | 07959559001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 5000 x 20µL反应(ABI棱镜) | 50毫升 |
| KK4618 | 07959575001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 5000 x 20µL反应(通用) | 50毫升 |
| KK4619 | 07959583001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 100 x 20µL反应(火箭低) | 1毫升 |
| KK4620 | 07959591001 |
KAPA SYBR快速qPCR套件- 500 x 20µL反应(火箭低) | 5毫升 |
| KK4621 | 07959605001 | KAPA SYBR快速qPCR套件- 1000 x 20µL反应(火箭低) | 10毫升 |
| KK4622 | 07959605001 |
KAPA SYBR快速qPCR套件- 5000 x 20µL反应(火箭低) | 50毫升 |
有什么推荐申请KAPA SYBR快速qPCR大师混合(2 x)包?
酶是什么KAPA SYBR快速qPCR大师混合(2 x)包?
KAPA SYBR DNA聚合酶是一个工程的变体TaqDNA聚合酶。它是专门用于SYBR Green-based qPCR通过定向进化的过程。KAPA SYBR DNA聚合酶既不被SYBR绿色染料,比野生型更前进的TaqDNA聚合酶,导致敏感性增加,荧光和速度。酶的综合抗体介入hotstart这期间仍不活跃的反应装置,减少非特异性产物的形成。
的好处是什么使用KAPA SYBR DNA聚合酶对SYBRGreen我qPCR吗?
多少我应该增加我的qPCR反应模板?
对于最优量化结果,使用20 ng每20µL基因组DNA或质粒DNA的反应。两步rt - pcr、使用未稀释的或稀释cDNA产生1µg的总RNA。互补脱氧核糖核酸(逆转录产品)的体积不应超过10%的最终PCR体积(例如20µL qPCR反应,使用未稀释的cDNA 2µL)。
什么时候我添加火箭被动引用染料qPCR反应?
对于某些实时周期计,火箭被动参考染料用于弥补non-PCR-related荧光检测的变化。从火箭参考荧光染料qPCR期间不会改变,但提供了一个稳定的基线,PCR-related荧光信号归一化。因此,火箭补偿之间的差异荧光检测井由于反应体积的微小变化或差异的位置。使用火箭(火箭高或火箭低)所有仪器应用生物系统公司和Stratagene Mx系列设备是可选的。仪器从Bio-Rad /乔丹研究、造父变星Corbett研究、试剂盒、埃普多夫和罗氏公司不需要火箭(尽管它重要的是要注意,Bio-Rad iCyclers需要染料荧光素作为一个被动的参考)。主混合火箭的存在不会干扰qPCR任何乐器,由于染料是没有参与反应,发射光谱不同于SYBR绿色的我。
我需要添加额外的氯化镁qPCR反应?
的KAPA SYBR qPCR大师(2 x) providesMgCl2混合在一个优化的最终浓度的2.5毫米,这是极不可能的额外MgCl2将提高反应效率或特异性。
为什么我需要初始激活时间大于10秒的95ºC的抗体介入hotstart DNA聚合酶吗?
尽管抗体介入热起动KAPA SYBR DNA聚合酶被激活后10秒95°C,优化变性模板可能需要3分钟。人类的基因组DNA,例如,或模板与GC含量高,需要更长的初始变性时间比质粒DNA。
什么是最短的结合扩展/退火时间吗?
最关键的因素之一在放大效率最大化SYBR Green-based qPCR最佳引物退火和延伸。最佳引物退火时间取决于引物的序列和长度。这意味着最低退火时间可能从20秒减少到15秒,但这必须是经验决定的。由于极高的持续KAPA SYBR DNA聚合酶,延长时间1秒的扩增子300个基点是充分的,3步协议应使用。
我为什么要使用一个3步骤循环协议,而不是一个两步协议?
当引物的最佳primer-annealing温度低于60ºC,转换为一个3步骤是明智的协议。例如,如果最佳退火温度55ºC,然后执行退火为20秒55ºC,其次是1秒扩展和数据采集在72ºC。
我怎么消除形成引物二聚体在没有模板控制(NTC) ?
NTC的引物二聚体形成的原因往往是由于多种因素。这些包括:最优引物退火温度(通常是由于不同的缓冲条件不同qPCR包),次优的引物合成(HPLC-purified引物导致减少引物二聚体形成和可用于低拷贝数检测),和穷人引物设计(使用软件如Primer3建议在设计引物时)。另一种方法是减少周期的总数在qPCR反应如果扩增引物二聚体的实验数据的范围之外的。如果被测样品平均Cq 28周期和只包含特定产品(没有引物二聚体),和全国过渡委员会放大37个周期后引物二聚体,反应可以运行35周期,而不是40。可以采取这种方法只有在被测样品产生一个特定的产品,而不是一个特定的产品和引物二聚体,当目标也不可能出现在低拷贝数。
为什么KAPA SYBR快速qPCR工具包不超越竞争对手包在所有情况下?
快速的原因KAPA SYBR qPCR装备其他用品市场上的表现主要是由于其优越的持续的健壮性KAPA SYBR DNA聚合酶在包包含野生型TaqDNA聚合酶。会有情况,特别是目标很容易被放大,的性能KAPA SYBR快速qPCR工具包将类似于竞争对手包。一般来说,最重要的性能上的差异将会注意到当放大从复杂目标,如人类基因组DNA或当放大模板或GC含量高。重要的是要注意,对另一个工具是表现不佳的另一个原因,如果循环条件KAPA SYBR快速qPCR装备不是通过骑自行车为野生型设计TaqDNA聚合酶(通常用化学为媒介热开始)将严重妥协我们的工程聚合酶的效率。
为什么信号强度的KAPA SYBR快速qPCR大师混合(2 x)装备火箭正常化后没有像预期的那样高吗?
正确的染料浓度和数量的引用添加到KAPA SYBR快速qPCR主组合优化分析是至关重要的。如果不正确的浓度或数量的参考染料添加到主结构,规范化的信号可能会低于预期(如果添加了太多的火箭),或高于预期(如果添加了火箭太少)。在使用前总是融化和混合解决方案。快速查阅相关KAPA SYBR qPCR套件用户指南,以确定正确的数量和浓度的火箭。如果使用ABI仪表、分析原始信号也可以执行与火箭过滤器关闭。
有哪些存储建议KAPA SYBR qPCR包快吗?
快速的KAPA SYBR qPCR主混合稳定在4ºC虽然也可以存储设备在-20ºC。这个工具包对光线很敏感,应该避免直射光,特别是在存储。还应该注意避免冻融循环。当存储在这些条件下,正确处理,设备的全部活动保留至少12个月,显示在工具标签。
我用ABI 7900 HT仪器后,骑车没有信号在放大窗口但当运行在一个特定的产品存在琼脂糖凝胶。
确保KAPA SYBR快速qPCR掌握混合包含火箭高(如果使用通用装备)。如果没有添加到主火箭混合,或不正确的火箭了,重新运行分析与火箭过滤器关闭。
可以KAPA SYBR快速qPCR包被用于罗氏LightCycler 2.0毛细管qPCR乐器吗?
是的。然而,罗氏LightCycler 1.2, 1.5和2.0毛细管仪器需要添加unacetylated BSA qPCR反应的最终浓度为250 ng /µL为了防止DNA聚合酶和模板绑定到玻璃毛细血管。
实现单复制检测的最好方法是什么?
反应效率高结合最佳引物设计和底漆净化实现单复制检测是至关重要的。反应效率可以使用一个优化退火温度梯度。应该使用合适的qPCR引物设计方案在设计引物时(例如Primer3)和高效液相色谱净化的引物强烈建议为了减少PCR产物的形成。