试剂盒可在-20℃下保存12个月。主混合物包括KAPA3G HotStart DNA聚合酶，dNTPs(包括dUTP)， MgCl2, ROX参考染料和稳定剂。
仅供研究用途。不用于诊断程序。
KAPA PROBE FORCE qPCR试剂盒含有高抗抑制剂的qPCR主混合物，无需DNA纯化，实现了简化的样品到cq的工作流程。通过我们的定向进化技术工程的第三代DNA聚合酶对血液、组织和植物PCR抑制剂具有耐药性。这使得粗样品的分析具有与纯化DNA相当的准确性、可重复性和敏感性。
图1。使用KAPA PROBE FORCE套件可在1小时内简化样品到cq的工作流程。
使用KAPA PROBE FORCE qPCR试剂盒查看显示与各种困难样品的高反应效率的数据。
图2。高效目标放大。对添加抑制剂的样品的反应效率进行了检查，并与纯化DNA的反应效率进行了比较。在不同类型的抑制剂中，效率保持在90-110%。
使用KAPA PROBE FORCE qPCR试剂盒查看显示广泛的抑制剂耐药性和一致的无Cq延迟扩增的数据。
图3。广泛的高抑制剂抗性。KAPA PROBE FORCE在所有测试的抑制剂中表现出一致和稳健的扩增，没有观察到Cq延迟。根据每个制造商推荐的循环条件，用纯化的DNA创建标准曲线，测量KAPA PROBE FORCE和竞争主混合料的基线性能。连续稀释的范围如下:人:100ng-10pg，小鼠:100ng-10pg，植物:25ng-8pg，细菌:2ng-2fg。抑制剂分别以高浓度添加到纯化的DNA样品中，以确定它们对Cq值的影响。绿色，<1 deltaCq，黄色，1-2 deltaCq，橙色，2-3 deltaCq，红色，>3 deltaCq。NA,没有放大。
图4。广泛的高抑制剂抗性。KAPA PROBE FORCE在所有测试的抑制剂中表现出一致和稳健的扩增，没有观察到Cq延迟。根据每个制造商推荐的循环条件，用纯化的DNA创建标准曲线，测量KAPA PROBE FORCE和竞争主混合料的基线性能。连续稀释的范围如下:人:100ng-10pg，小鼠:100ng-10pg，植物:25ng-8pg，细菌:2ng-2fg。抑制剂分别以高浓度添加到纯化的DNA样品中，以确定它们对Cq值的影响。绿色，<1 deltaCq，黄色，1-2 deltaCq，橙色，2-3 deltaCq，红色，>3 deltaCq。NA,没有放大。
图5。广泛的高抑制剂抗性。KAPA PROBE FORCE在所有测试的抑制剂中表现出一致和稳健的扩增，没有观察到Cq延迟。根据每个制造商推荐的循环条件，用纯化的DNA创建标准曲线，测量KAPA PROBE FORCE和竞争主混合料的基线性能。连续稀释的范围如下:人:100ng-10pg，小鼠:100ng-10pg，植物:25ng-8pg，细菌:2ng-2fg。抑制剂分别以高浓度添加到纯化的DNA样品中，以确定它们对Cq值的影响。绿色，<1 deltaCq，黄色，1-2 deltaCq，橙色，2-3 deltaCq，红色，>3 deltaCq。NA,没有放大。
使用KAPA PROBE FORCE qPCR试剂盒从各种粗样品中查看显示高效基因分型和SNP检测的数据。
图6。粗样双相SNP检测。KAPA PROBE FORCE在粗提取物(A)棉花种子，0.5 m NaOH萃取物，(B)葡萄叶，75 mM Tris-HCL和5 mM TCEP萃取物，(C)小鼠血液，FTA 0.5 mM盘，(D)小鼠尾巴提取物，NaOH萃取物存在的情况下提供精确的基因分型和紧密聚类，用于快速SNP分析。
图7。粗样双相SNP检测。KAPA PROBE FORCE在粗提取物(A)棉花种子，0.5 m NaOH萃取物，(B)葡萄叶，75 mM Tris-HCL和5 mM TCEP萃取物，(C)小鼠血液，FTA 0.5 mM盘，(D)小鼠尾巴提取物，NaOH萃取物存在的情况下提供精确的基因分型和紧密聚类，用于快速SNP分析。
图8。粗样双相SNP检测。KAPA PROBE FORCE在粗提取物(A)棉花种子，0.5 m NaOH萃取物，(B)葡萄叶，75 mM Tris-HCL和5 mM TCEP萃取物，(C)小鼠血液，FTA 0.5 mM盘，(D)小鼠尾巴提取物，NaOH萃取物存在的情况下提供精确的基因分型和紧密聚类，用于快速SNP分析。
图9。粗样双相SNP检测。KAPA PROBE FORCE在粗提取物(A)棉花种子，0.5 m NaOH萃取物，(B)葡萄叶，75 mM Tris-HCL和5 mM TCEP萃取物，(C)小鼠血液，FTA 0.5 mM盘，(D)小鼠尾巴提取物，NaOH萃取物存在的情况下提供精确的基因分型和紧密聚类，用于快速SNP分析。
*数据文件。
KAPA探针力的推荐应用是什么?
KAPA探针力中的酶是什么?
该产品包含第三代DNA聚合酶，进化以克服PCR抑制剂的影响。这种DNA聚合酶也可以实现非常快速的反应协议。该酶与一种专有抗体结合，使酶在第一个变性步骤前失活，消除了在反应建立和启动过程中由非特异性启动事件产生的假扩增产物，并提高了整体反应效率。
哪些探针化学物质与KAPA探针力兼容?
KAPA PROBE FORCE qPCR Master Mix与所有基于探针的化学试剂兼容，包括水解和杂交探针。
在我的qPCR反应中，引物/探针的浓度应该是多少?
引物和探针的最终浓度一般为0.1µM - 0.5µM。建议您从0.2 μ M的初始最终浓度开始。使用最低浓度仍能产生最佳PCR效率。
对有问题的分析有什么优化建议吗?
引物和探针设计
规模的扩增子
探针浓度
仪器变化
在使用探针时，什么会导致高背景荧光水平?
如果探针被降解，荧光团与淬灭器分离，导致背景荧光增加。当稀释探针或引物和建立反应时，只能使用无菌缓冲液、水和实验室塑料。
KAPA探针力qPCR主混合剂是否含有参考染料?
是的。KAPA PROBE FORCE qPCR Master Mix含有低浓度的ROX，可与多种实时热循环器兼容。
什么时候我需要在我的qPCR反应中添加额外的氯化镁?
KAPA PROBE FORCE qPCR Master Mix中含有最终浓度为4.5 mM的氯化镁，这足以进行绝大多数反应。通常不需要额外的镁，除非已知反应模板含有显著浓度的镁螯合化合物(如EDTA)，并且在反应中使用高浓度的镁。
多重检测的推荐反应条件是什么?
从标准建议引物/探针浓度(0.2 μ M)和反应方案开始。只要引物和探针的设计使检测之间的干扰最小，结果应该是令人满意的。包括多个无模板控制反应，以确保引物和探针本身在没有模板的情况下不会引起假信号。由于复配反应中引物的总浓度是标准反应的几倍，所以发生非特异性相互作用的可能性要高得多。这可以通过使用最低的引物/探针浓度和最短的退火/延伸时间来解决，但仍然可以获得最佳的PCR效率。减少PCR反应体积也减少了非特异性相互作用的可能性。
从哪里开始优化粗样品或粗提取物作为PCR模板?
KAPA探针力每次反应能耐受多少肝素血或肝素?
KAPA PROBE FORCE在20µl的反应中可以耐受高达10 ng的肝素(0.0021 IU)，且无显著抑制作用。每20 μ l反应使用0.5 μ l 10倍稀释的肝素血作为起始点。
每次反应建议使用多少EDTA血与KAPA探针力?
在20µl的反应中使用1µl的10倍稀释剂。
为什么推荐的初始变性时间这么长(3 - 10分钟)?
抗体介导的KAPA 3G DNA聚合酶热启动在98°C下20秒后完全失活，但复杂模板的最佳变性可能需要长达3分钟或更长时间。有些类型的粗样品，如植物叶盘或种子碎片，可能需要10分钟的最佳结果。
我可以使用标准循环协议而不是快速循环协议吗?
KAPA PROBE FORCE在推荐的快速循环协议上表现最好，但在标准(慢)协议上也会得到很好的结果。
什么可以导致无模板控件(ntc)产生积极的结果?
主混合物、引物原液、水或PCR设置环境可能被DNA模板或前一次PCR扩增的PCR产物污染。设计和/或合成不当的引物和探针也有可能导致“假阳性”结果;降解的引物和探针也可能导致同样的结果。应遵循良好的实验室规范，以避免DNA模板污染。
KAPA PROBE FORCE qPCR混合蛋白的储存建议是什么?
KAPA PROBE FORCE qPCR Master Mix应在-20°C下长期保存(从收到试剂盒起最长可保存12个月)。对于短期的短期储存，更方便的方法是在4°C下储存3个月。永远保护套件避光，因为它含有ROX参考染料。