试剂盒可在-20˚C保存12个月。
试剂盒包括KAPA PROBE FAST qPCR主混合(2X)，其中包含KAPA Taq HotStart DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTPs和MgCl2，最终浓度为5 mM。注意，主混合包含仪器专用参考染料，而通用试剂盒分别包含ROX High和ROX Low(均为50倍)。
仅供研究用途。不用于诊断程序。
KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒为所有基于探针的qPCR应用提供快速和可复制的结果。试剂盒包含一种可随时使用的主混合物，用于使用特定序列的荧光探针化学物质，包括水解探针(如TaqMan)、FRET探针和置换探针(如分子信标)，进行高灵敏度和精确的实时PCR。
使用KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒查看显示离散等位基因簇的基因分型数据。
图1。在ABI 7900HT实时PCR系统上使用ATP1B3 SNP基因分型方法成功地对168个人类基因组DNA样本和24个无模板对照进行了基因分型。反应量还包括人类基因组DNA (10 ng)，每个引物200 nM，每个水解探针(等位基因X - FAM/ BHQ-1，等位基因Y - VIC/ BHQ-1) 200 nM，使用以下标准循环协议:95ºC 10分钟，然后95ºC 40个循环，15秒;60ºC, 60秒。
查看KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒的性能数据，从5个扩增子的多重qPCR扩增。
图2。5点稀释序列中的5个扩增子的结果是在使用快速循环协议的五倍体中测定得到的。反应量还包括人类基因组DNA (0.39 ng - 100 ng)，每个底物200 nM，每个水解探针(ACTB - FAM/BHQ-1, ERBB2 - CAL Fluor Gold 540/ BHQ-1, ERBB3 - CAL Fluor Orange 560/ BHQ-2, EGFR - CAL Fluor Red 610/ BHQ-2, ACTG1 - Quasar 705/ BHQ-2) 200 nM，使用以下快速循环协议:95ºC 3分钟，然后95ºC循环40次，15秒;60ºC, 15秒。
图3。使用快速循环协议，可获得具有相似丰度水平的低拷贝数样品的连续稀释结果。反应量包括人类基因组DNA(每个反应范围89 - 450拷贝1.5倍稀释)，200 nM的每个引物，200 nM的hApoB100 (FAM/ BHQ-1)水解探针，使用快速循环协议:95ºC 3分钟，然后95ºC 40个循环，3秒;60ºC, 20秒。
图4。用10倍稀释的合成寡核苷酸靶标(60 - 6 × 106拷贝，每个反应)生成扩增图，三次重复检测。反应体积还包括每种引物的200 nM和200 nM的hApoB100 (FAM/ BHQ-1)水解探针，使用以下快速循环协议:95ºC 3分钟，然后95ºC 3秒，循环40次;60ºC, 30秒。
使用KAPA PROBE fast qPCR试剂盒查看与标准或快速协议相比qPCR性能的数据。
图5。放大图的生成采用标准循环协议(95ºC持续10分钟，然后95ºC持续15秒，循环40次);60ºC, 60秒)或快速循环协议:95ºC, 3分钟，然后95ºC, 3秒，循环40次;60ºC, 20秒。反应量还包括人类基因组DNA(10倍稀释0.1 ng - 100ng每个反应范围)，200 nM的每个引物，200 nM的hApoB100 (FAM/ BHQ-1)水解探针。
*数据文件。
试剂盒可在-20˚C保存12个月。
试剂盒包括KAPA PROBE FAST qPCR主混合(2X)，其中包含KAPA Taq HotStart DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTPs和MgCl2，最终浓度为5 mM。注意，主混合包含仪器专用参考染料，而通用试剂盒分别包含ROX High和ROX Low(均为50倍)。
| 设备代码 | 2X KAPA探针qPCR主混合(通用) | 50X KAPA探针ROX高 | 50X KAPA探针ROX低 | 2X KAPA探针qPCR主Mix(含设备专用染料) | 2X KAPA探针qPCR主混合(ROX Low) | 10毫米dUTP | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 通用 | KK4701 | X | X | X | |||
| KK4702 | |||||||
| KK4703 | |||||||
| KK4715 | |||||||
| 通用与dUTP | KK4721 | X | X | X | X | ||
| KK4722 | |||||||
| KK4723 | |||||||
| ABI棱镜 | KK4705 | X | |||||
| KK4706 | |||||||
| KK4707 | |||||||
| Bio-Rad iCycler | KK4709 | X | |||||
| KK4710 | |||||||
| KK4711 | |||||||
| 火箭低 | KK4716 | X | |||||
| KK4717 | |||||||
| KK4718 | |||||||
| KK4719 |
试剂盒包括用于RNA碎片、cDNA合成和文库制备的试剂。也可使用含有mRNA捕获试剂的试剂盒。
| 设备代码 | 罗氏的猫。没有 | 描述 | 包大小 |
|---|---|---|---|
| KK4701 | 07959800001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 100 x 20 μ L反应(通用) | 1毫升 |
| KK4702 | 07959818001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 500 x 20 μ L反应(通用) | 5毫升 |
| KK4703 | 07959826001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 1000 x 20 μ L反应(通用) | 10毫升 |
| KK4705 | 07959842001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 100 x 20 μ L反应，ROX (ABI Prism) | 1毫升 |
| KK4706 | 07959869001 | KAPA探针快速qPCR试剂盒- 500 x 20 μ L反应，ROX (ABI Prism)5 mL | 5毫升 |
| KK4707 | 07959877001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 1000 x 20 μ L反应，ROX (ABI Prism) | 10毫升 |
| KK4709 | 07959893001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 100 x 20 μ L反应，荧光素(Bio-Rad iCycler) | 1毫升 |
| KK4710 | 07959907001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 500 x 20 μ L反应，荧光素(Bio-Rad iCycler) | 5毫升 |
| KK4711 | 07959915001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 1000 x 20 μ L反应，荧光素(Bio-Rad iCycler) | 10毫升 |
| KK4715 | 07959931001 | KAPA探针快速qPCR试剂盒- 5000 x 20 μ L反应(通用) | 50毫升 |
| KK4716 | 07959940001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 100 x 20 μ L反应(ROX Low) | 1毫升 |
| KK4717 | 07959958001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 500 x 20 μ L反应(ROX Low) | 5毫升 |
| KK4718 | 07959966001 | KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒- 1000 x 20 μ L反应(ROX Low) | 10毫升 |
KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix (2X)试剂盒的推荐应用是什么?
KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix (2X)试剂盒中的酶是什么?
本产品含有KAPA Taq HotStart DNA聚合酶。在HotStart配方中，酶与专利抗体结合，使酶失活直到第一个变性步骤，消除了在反应建立和启动过程中由非特异性启动事件产生的假扩增产物，并提高了整体反应效率。
KAPA probe FAST qPCR主混合试剂盒可以使用哪种化学试剂?
KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒兼容所有基于探针的化学试剂，包括水解和杂交探针。该试剂盒经过优化，在多重分析中具有最佳性能，使该试剂盒特别适合基因表达分析。该试剂盒也可用于等位基因鉴别分析，如SNP基因分型分析。
在我的qPCR反应中我应该在什么浓度使用我的探针?
探头的最终浓度一般为100 nM - 400 nM。我们建议从最终浓度200 nM开始。
qPCR探针应该在哪个缓冲液中重悬?
荧光团对水解很敏感，在低pH值下水解会加速。我们建议在pH 8.0 TE缓冲液(10 mM Tris-Cl, 1 mM EDTA)中重新悬浮探针。
qPCR探针应该如何储存?
探头应经受最少的冻融循环次数。因此，探头最好先准备好，以便在-20℃或-80℃作为100 μM浓缩物长期储存。将一部分原液稀释到适当的工作浓度，如10 μM，再放入微瓶中，在-20℃或-80℃保存。为确保最佳活性，荧光探针应始终避免光的照射，以避免光漂白。探针和引物在-20℃或-80℃保存稳定超过一年。但是，请参考探针制造商的说明，以了解探针配方的具体信息。
在使用探针时，什么会导致高背景电平?
探针对降解非常敏感，这将荧光团与淬灭剂分离。当使用荧光标记探针时，必须使用无菌试管和针尖，以避免dna酶的污染。
在我的qPCR反应中用引物的浓度是多少?
引物的最终浓度一般为100 nM - 400 nM。我们建议从最终浓度200 nM开始
．
什么时候我应该在我的qPCR反应中加入ROX被动参比染料?
对于某些实时循环试剂，实时PCR中ROX参考染料的存在补偿了荧光检测中与非PCR相关的变化。ROX参比染料的荧光在实时PCR过程中不发生变化，但为PCR相关荧光信号的归一化提供了稳定的基线。因此，ROX染料补偿了由于反应体积的微小变化或井位的不同而导致的井间荧光检测的差异。应用生物系统公司的所有仪器都必须使用ROX染料，Mx3000P、Mx3005P和Mx4000是可选的®．来自Bio-Rad/MJ Research、Cepheid、Corbett Research、Eppendorf和Roche的仪器不需要ROX染料。
我需要在我的qPCR反应中添加额外的氯化镁吗?
MgCl2的浓度影响引物和探针与模板DNA的结合动力学。PCR反应的最终mgcl2浓度越高，引物与探针对目标DNA的结合亲和力越大。KAPA PROBE FAST qPCR Master Mix (2X)提供的MgCl2最终浓度为5.0 mM。添加的MgCl2不太可能提高反应效率或特异性。
为什么抗体介导的热启动DNA聚合酶需要在95ºC下超过10秒的初始激活时间?
尽管抗体介导的热启动版本的KAPA Taq DNA聚合酶在95℃下10秒后被激活，但模板的最佳变性可能需要长达3分钟。例如，人类基因组DNA需要比质粒DNA更长的初始变性时间。
我可以使用标准循环协议而不是快速循环协议吗?
是的，KAPA PROBE FAST已被制定为支持标准(慢)和快速循环协议。
什么会导致无模板控件(NTC)给出积极的结果?
主混合物、引物和/或水可能被DNA模板或前一次PCR扩增的PCR产物污染。应使用良好的实验室规范以避免DNA模板污染。设计、合成或降解不良的引物和探针也有可能导致“假阳性”结果。
KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒的储存建议是什么?
KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒从收到试剂盒起应在-20℃下长期保存1年。该套件保持稳定性和性能高达30个冻融循环。对于短期存储，可能更方便的方法是将试剂盒在4℃的环境下保存3个月。如果试剂盒中含有ROX或荧光素参考染料，请始终避免光线照射。
KAPA PROBE FAST qPCR试剂盒可以与Roche LightCycler一起使用吗®II毛细管qPCR仪?
是的。然而，罗氏LightCycler®II毛细管仪要求在qPCR反应中加入最终浓度为250 ng/µL的牛血清白蛋白，以防止DNA聚合酶和模板结合到玻璃毛细管上。