试剂盒可在-20°C下储存18个月。
KAPA小鼠基因分型试剂盒包括KAPA快速提取酶(1 U/µL)， KAPA快速提取缓冲液(10X)和KAPA2G快速(或快速HotStart)基因分型Mix (2X)，其中包含DNA聚合酶，负载染料的反应缓冲液，dNTPs和MgCl2(最终浓度为1.5 mM)。用于PCR的readymix也单独出售。
仅供研究使用。不用于诊断程序。
KAPA小鼠基因分型试剂盒包括KAPA Express Extract，这是一种新型耐热蛋白酶和缓冲系统，可在短短15分钟内从小鼠组织中提取pcr准备好的DNA。该试剂盒还包括KAPA2G快速基因分型混合染料，其中含有通过我们的定向进化技术设计的DNA聚合酶，具有高加工效率和极高的速度。KAPA Express Extract和KAPA2G Fast Genotyping Mix的组合可在短短1小时内可靠地从小鼠组织中提取和扩增DNA片段，而传统方案则需要≥1天。
查看比较数据，显示使用KAPA小鼠基因分型试剂盒与使用野生型相比，提取和扩增时间显著减少，PCR性能具有可比性Taq和蛋白酶K或碱性裂解。
图1。使用KAPA小鼠基因分型试剂盒、蛋白酶K和野生型比较DNA提取和扩增所需的总时间Taq、碱性裂解型和野生型Taq．
图2。用KAPA小鼠基因分型试剂盒(1)生成的5个扩增子(312 -915 bp)的结果与用两种常用方法(2和3)获得的结果进行了比较。使用KAPA小鼠基因分型试剂盒，用快速(15分钟)单管KAPA快速提取系统从小鼠尾部制备DNA裂解物。使用KAPA2G Fast HotStart基因分型Mix与染料在45分钟内完成扩增。相比之下，DNA裂解物是用~3.5小时蛋白酶K方案(2)或快速(~2.5小时)碱性裂解方法(3)制备的(上图)。在这两种情况下，均使用野生型进行扩增Taq(1.5小时骑行方案)。使用KAPA小鼠基因分型试剂盒获得的结果与使用其他方法获得的结果相同或更好(更具体)，后者(取决于所使用的确切DNA提取方案)可能需要至少四倍的时间，或最多1天才能完成。
查看数据显示，与其他市售试剂盒相比，KAPA小鼠基因分型试剂盒的多重PCR性能相当或更好，每次PCR反应的成本降低，以及在多重PCR中使用KAPA小鼠基因分型试剂盒的敏感性、产量和特异性更好。
*文件中的数据。
KAPA小鼠基因分型试剂盒包括KAPA快速提取酶(1 U/µL)， KAPA快速提取缓冲液(10X)和KAPA2G快速(或快速HotStart)基因分型Mix (2X)，其中包含DNA聚合酶，负载染料的反应缓冲液，dNTPs和MgCl2(最终浓度为1.5 mM)。用于PCR的readymix也单独出售。
| 设备代码 | 罗氏的猫。没有 |
描述 |
包大小 |
|---|---|---|---|
| KK7302 |
07961766001 |
KAPA小鼠基因分型试剂盒-非hotstart PCR |
500年的反应 |
| KK7352 |
07961804001 |
KAPA小鼠基因分型试剂盒-标准试剂盒 |
500年的反应 |
| KK5121 |
07960921001 |
KAPA小鼠基因分型试剂盒-非hotstart PCR，不提取 |
500 x 25 μ L反应 |
| KK5621 |
07961316001 |
KAPA小鼠基因分型试剂盒- HotStart PCR，不提取 |
500 x 25 μ L反应 |
KAPA小鼠基因分型试剂盒的推荐应用是什么?
KAPA小鼠基因分型试剂盒非常适合快速提取和扩增小鼠尾巴、耳朵和脚趾组织的DNA。该试剂盒也适用于从其他动物组织中提取和扩增DNA，但可能需要优化方案。
使用KAPA小鼠基因分型试剂盒的主要好处是什么?
KAPA小鼠基因分型试剂盒包含从小鼠组织中快速提取和扩增DNA所需的一切:
KAPA小鼠基因分型试剂盒包括什么?
KAPA小鼠基因分型试剂盒包括KAPA Express Extract，一种新型耐热蛋白酶和缓冲系统，可在短短15分钟内从小鼠组织中提取pcr准备好的DNA; KAPA2G Fast Genotyping Mix with dye，其中包含一种DNA聚合酶，该DNA聚合酶通过定向进化过程设计，具有高加工性和极快的速度。
我应该在萃取反应中加入多少小鼠样本?
大约2毫米3.老鼠尾巴或2毫米的碎片2拔牙时应考虑对耳部组织的冲击。
如果提取反应中仍然可见组织，裂解是否失败?
不，组织不会完全降解，不像蛋白酶K消化。这是正常的，绝不是裂解失败的迹象。
我可以在PCR之前定量提取的DNA吗?
由于使用Express Extract提取的粗性，在PCR前的定量不具有信息量。相反，应该先在PCR中使用1µL粗提物(最好用TE或10 mM Tris-HCl稀释1:10,pH 8.0-8.5以去除潜在的抑制剂)，并在初始实验后根据需要增加或减少。
PCR前需要离心吗?
离心步骤是可选的。如果裂解液将被长期保存，则建议在缓冲溶液中稀释之前离心并将上清转移到新鲜管中。反应产物高速离心1分钟足以将碎屑颗粒化，上清液易于回收。在某些情况下，碎片不会形成颗粒，而是在整个提取过程中保持悬浮状态。在这种情况下，建议将含有dna的液体小心地转移到新鲜的试管中，以便下游使用和储存。
一个DNA提取反应可以进行多少个PCR反应?
如果使用未稀释的裂解液，一次提取可产生最多100×25 μ L的pcr模板。每25 μ L反应使用1 μ L DNA提取物作为起始点。
如果出现以下情况，优化的关键领域是什么:
PCR后目标片段无产量或产量低?
涂抹还是非特异性扩增?
KAPA2G快速基因分型组合的推荐扩展率是多少?
对于大多数< 1kb的扩增子，推荐10秒/kb。扩展时间可以增加到30秒/kb的扩增子，以低产量扩增。只有在片段分析或克隆到TA克隆载体中需要3 ' - da -tail时才需要最终扩展。
KAPA2G快速基因分型试剂盒的最佳退火温度和时间是多少?
任何PCR分析的最佳退火温度取决于特定的模板-引物组合。为了获得最佳结果，设计引物的最佳退火温度为55 - 60°C。可以使用较低退火温度的引物，但不建议退火温度<50℃。每个循环的退火时间不要超过15秒，因为这可能会导致非特异性扩增和/或涂抹。
KAPA2G快速基因分型试剂盒的最佳循环次数是多少?
最佳循环次数取决于模板浓度。从35开始，根据需要增加或减少。
KAPA快速基因分型试剂盒的PCR反应中是否需要添加镁?
KAPA快速基因分型Mix含有MgCl2如有必要，可添加额外的MgCl2以获得最佳结果(0.5 μ L 25 mM原液对应0.5 mM MgCl2> 1.5毫米)。
KAPA2G快速基因分型Mix和KAPA2G快速HotStart基因分型Mix有什么区别?
KAPA2G Fast HotStart基因分型Mix包含KAPA2G Fast DNA聚合酶和专有抗体，使酶失活，直到第一步变性。这消除了在反应设置和启动过程中由非特异性引物事件引起的虚假扩增产物，并提高了整体反应效率和灵敏度。当使用非热启动混合物时，在PCR设置过程中必须在冰上工作。
KAPA2G快速基因分型混合中包含的染料是什么?
KAPA2G快速基因分型混合物中的染料允许在PCR后直接将PCR产物加载到凝胶上。它含有两种染料成分的混合物，这使混合物在装载时呈绿色。在电泳过程中分解成蓝色和橙色成分。蓝色条带在1%的凝胶上带有3 - 4 kb的片段，而橙色条带带有小于50 bp的片段。
KAPA小鼠基因分型试剂盒的储存建议是什么?
KAPA小鼠基因分型试剂盒可在4°C下定期短期使用(最多1周)。如果试剂盒已被小心处理且未被污染，则即使(无意中)在室温下放置短时间(最多24小时)，试剂盒组件也不会受损。不建议在室温或4℃下长期保存。
我应该如何存储我的DNA提取物?
使用KAPA快速提取液生成的DNA提取物可存储在-20°C，以便在一段时间内用于多个pcr。也建议以较小的比例储存。建议将DNA提取物在TE Buffer中稀释1:10进行长期存储，以确保DNA存储在缓冲环境中。然而，稀释因子可以在1:1和1:20之间变化，这取决于DNA的下游应用和产量。对于对EDTA敏感的下游应用，TE可替换为10 mM Tris-HCl, pH 8.0-8.5。
通过替代方案提取的样本是否可以与KAPA2G快速基因分型混合试剂盒一起使用?
是的，KAPA2G快速基因分型混合可用于从小鼠组织中提取的DNA，方法多种多样。用于基因分型PCR的最佳DNA提取量应通过使用不同稀释度的模板进行PCR来确定。
用KAPA小鼠基因分型试剂盒生成的产品能被消化、克隆和测序吗?
是的，KAPA小鼠基因分型试剂盒产生的PCR产物与野生型Taq聚合酶产生的PCR产物具有相同的特征。它们可以用限制性内切酶测序或用标准方法进行酶切。产物为3 ' - da尾，可用于TA克隆，也可在克隆前钝端或用限制性内切酶消化。为获得最佳效果，建议使用任何标准PCR清除试剂盒进行PCR产物的纯化。
提取的DNA可以直接用于qPCR反应吗?
是的，DNA可以从常用的小鼠组织中提取，并使用KAPA SYBR FAST作为小鼠基因分型qPCR分析的模板。KAPA快速提取酶热失活后，样品应离心1分钟至颗粒碎片，含dna的上清应转移到单独的管中。推荐的反应设置和循环方案如下:
KAPA SYBR FAST反应设置每20µL反应
KAPA SYBR快速循环协议