Elecsys^®Anti-SARS-CoV-2年代

用于SARS-CoV-2刺突蛋白抗体定量测定的免疫分析法

用于SARS-CoV-2刺突蛋白抗体定量测定的免疫分析法

Elecsys^®anti - cov - 2s是一种体外定量测定人血清和血浆中sars - cov - 2s蛋白RBD总抗体的免疫测定方法。该方法采用重组RBD蛋白，采用双抗原夹心法，有利于对SARS-CoV-2高亲和力抗体的定量检测。该检测旨在帮助评估自然感染SARS-CoV-2后或接种疫苗者对SARS-CoV-2 S蛋白的适应性体液免疫反应(包括中和抗体)。

SARS-CoV-2:病毒结构、传播和检测概述

严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)是一种包膜单链RNA β冠状病毒，是2019年冠状病毒病(COVID-19)的病原体。七种冠状病毒已被确定为人类感染病原体，可引起从轻度普通感冒到严重呼吸衰竭的疾病。¹

SARS-CoV-2主要通过呼吸道飞沫和气溶胶在人与人之间传播。^2、3从感染到宿主内可检测到病毒载量的潜伏期通常为2至14天。^4、5病毒载量的检测可能与临床体征和症状的出现有关，尽管相当一部分人仍然无症状或轻度症状。^{6 - 8}COVID-19患者具有传染性的时间间隔尚未明确确定，但有症状、无症状和症状前个体之间的传播已得到很好的描述。^{9 - 11}

冠状病毒基因组编码4种主要结构蛋白:突刺(S)、包膜(E)、膜(M)和核衣壳(N)。S蛋白是一种非常大的跨膜蛋白，它组装成三聚体，形成冠状病毒独特的表面突刺。每个S单体由一个n端S1亚基和一个膜近端S2亚基组成。病毒通过S蛋白与血管紧张素转换酶2 (ACE2)受体结合进入宿主细胞，该受体存在于多种细胞类型的表面，包括肺的肺泡II型细胞和口腔黏膜的上皮细胞。^12、13在机制上，ACE2与S1亚基上的受体结合域(RBD)结合。^14、15

感染SARS-CoV-2后，宿主通常会对病毒产生免疫反应，通常包括产生针对病毒抗原的特异性抗体。抗SARS-CoV-2的IgM和IgG抗体似乎几乎同时出现在血液中。¹⁶COVID-19患者的抗体水平和时间表现在个体间存在显著差异，但在大约两周时观察到血清转换的中位数。^17日

在感染或接种疫苗后，抗体与抗原的结合强度随着时间的推移而增加——这一过程被称为亲和成熟²¹．高亲和力抗体可以通过识别和结合特定的病毒表位来诱导中和^22、23．已经发现了具有强大中和能力的SARS - CoV - 2抗体，特别是针对RBD的抗体。^{24 - 27日}许多COVID-19疫苗正在开发中，其中许多侧重于引发对RBD的免疫反应。^{28 - 30}

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SARS-CoV-2刺突蛋白的结构及其与宿主受体的结合

临床敏感性³¹

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临床敏感性³¹

采用Elecsys系统对PCR检测结果为SARS-CoV-2感染的402例症状患者的1610份样本(其中243例住院患者的297份样本)进行检测^®抗sars - cov -2 S检测。在PCR确认后的不同时间点采集这些患者的一个或多个序列样本。

其中1423份样本在PCR诊断后的取样日期为14天或更晚。在这1423个样品中，有1406个样品在Elecsys中含量≥0.8 U/mL^®抗SARS - CoV - 2s试验，因此被认为是阳性的，导致敏感性为98.8% (95% ci: 98.1 - 99.3%)在这个样本队列中。

PCR确认后几天

PCR确认后几天	N	无电抗	*灵敏度(95% CI)**
0 - 6天	35	4	88.6% (73.3 - 96.8%)
7 - 13天	152	22	85.5% (78.9 - 90.7%)
14到20天	130	14	89.2% (82.6 - 94%)
天21日- 27日	176	3.	98.3% (95.1 - 99.7%)
28-34天	197	0	100% (98.1 - 100.0%)
≥35天	920	0	100% (99.6 - 100.0%)

*置信区间

分析特异性³¹

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分析特异性³¹

使用Elecsys检测了2019年10月前收集的1100份可能发生交叉反应的样本，包括mers - cov抗体阳性样本、有普通感冒症状的个体样本，以及确诊感染四种普通感冒冠状病毒之一的个体样本^®抗sars - cov -2 S检测。这组潜在交叉反应样本的总体特异性为100% (95% ci: 99.7 - 100.0%)．

队列	N	无功	特异性(95% CI)
MERS-CoV *	7	0	One hundred.% (59.0 - 100.0 %)
普通冷板**	21	0	One hundred.% (83.4 - 100.0 %)
冠状病毒面板* * *	94	0	One hundred.% (96.2 - 100.0 %)
其他可能交叉反应的样品****	978	0	One hundred.% (99.6 - 100.0 %)
整体	1100年	0	100% (99.7 - 100.0%)

*中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERS-CoV)刺突蛋白亚单位S1抗体阳性
** 2019年10月前采集的普通感冒症状个体样本40份
***既往感染过HKU1、NL63、229E或OC43冠状病毒，经抗原检测确诊
****对各种其他指征具有反应性的大流行前样本，可能具有较高的非特异性干扰潜力

临床特异性³¹

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队列	N	无功	特异性(95% CI)
诊断程序	2528年	0	100% (99.85 - 100.0%)
美国献血者	2713年	1	99.96% (99.79 - 100.0%)
非洲献血者	750	0	100% (99.51 - 100.0%)
整体	5991年	1	99.98% (99.91 - 100.0%)

检测SARS-CoV-2疫苗主动免疫诱导的抗体³¹

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检测SARS-CoV-2疫苗主动免疫诱导的抗体³¹

接种Moderna疫苗后，接种Spikevax疫苗^®(mRNA - 1273)和辉瑞- BioNTech疫苗协会^®(BNT162b2)，采用分别批准的2剂疫苗接种方案，使用Elecsys评估接种者infection-naïve个体的抗体反应^®在三个时间点进行抗sars - cov -2检测:疫苗接种前(基线)、第一次疫苗接种后21天和第二次疫苗接种后14天。接种疫苗后，观察到抗体滴度迅速上升，表明对疫苗接种有强烈的体液免疫反应。所有接种疫苗后基线血清转化为阴性的个体。

检测结果与血清中和能力的相关性³¹

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检测结果与血清中和能力的相关性³¹

在一项调查COVID - 19恢复期血浆病毒中和能力的研究中，使用体外斑块减少中和(PRNT)试验(BROAD研究所，美国)分析了SARS - CoV - 2感染后恢复期捐赠者捐献的血浆对整个病毒中和能力的影响。在1:20稀释>的样品中存在50%中和(NT50)，在体外鉴定出功能性病毒中和。PRNT分析了390份捐赠，包括横截面和纵向样本面板，并与Elecsys进行了比较^®通过应用两个不同的阈值来获得抗SARS - CoV - 2 S检测结果:一个代表检测rbd特异性抗体的检测截止值(0.8 U/mL)，另一个基于与检测病毒中和效应的优化相关性(15 U/mL)。

		病毒中和试验
		中和 (nt50≥1:20)	Non-neutralizing	总计
Elecsys^®反- SARS - x - 2 S	≥0.8 U /毫升	356	4	360
	< 0.8 U /毫升	2	28	30.
	总计	358	32	390
正面一致性百分比	99.4% (98.0 - 99.9%)
负面协议百分比	87.5% (71.0 - 96.5%)
正向预测值	98.9% (97.2 - 99.7%)

Elecsys^®反- SARS - x - 2 S	≥15 U /毫升	331	0	331
	< 15 U /毫升	27	32	59
	总计	358	32	390
正面一致性百分比	92.5% (89.2% - 95.0%)
负面协议百分比	100% (89.1 - 100.0%)
正向预测值	100% (98.9 - 100.0%)

SARS-CoV-2感染标志物的估计过程³²

参考文献

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苏珊·佩恩，学术出版社，61-71页，ISBN 9780128031094。
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Elecsys^®材料编号09289267190，方法表2022-07,V3.0。材料编号09289275190，方法表2022-06,V4.0。
Koch, T. et al.(2021)。疫苗9(3):238。

系统规范

测试时间

18分钟
测试原理

一步双抗原夹心试验
可追溯性

根据罗氏抗SARS - CoV - 2 - S内部标准进行标准化。世卫组织第一个抗SARS - CoV 2免疫球蛋白国际标准(NIBSC代码:20/136)表现与内部罗氏标准相同(定量限与1000 BAU/mL之间的Pearson r = 0.9996)。因此，数值结果在U/mL的Elecsys^®Anti - SARS - CoV - 2s检测与WHO BAU/mL相当。
线性范围

0.4 ~ 250 U/mL
校准

2点(单独的CalSet)
解释

<0.8 U/mL =非活性，≥0.8 U/mL =活性
标本类型

使用标准样管或含有分离凝胶的样管采集血清;Li-heparin K₂edta - K_3.- edta -和柠檬酸钠血浆。肝素和K₂可使用含有分离凝胶的EDTA等离子管。毛细管血采集于血清、肝素血浆或K₂- EDTA等离子取样管。
样品体积

20μLcobas e411分析仪,cobas e601 /cobas e602模块
12μLcobas e402 /cobas e801个分析单位
机载稳定

28天cobas e411分析仪,cobas e601 /cobas e602模块
16周cobas e402 /cobas e801个分析单位
阳性样本的中等精度

cobas e411分析仪:CV* 1.9 - 2.9%
cobas e601 /cobas e602模块:CV 2.7 - 3.6%
cobas e402 /cobas e801个分析单位:CV 1.4 - 2.4%
*变异系数

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